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組成 |
100頭份 |
貯藏條件 |
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陰性對照（ddH2O） |
1 mL |
-20℃ |
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陽性對照（PTC） |
20 μL |
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20×反轉錄酶混合液（酶Mix） |
110 μL |
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2.5×PTD qPCR 反應液*1（qMix） |
850 μL |
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2.5×PTD引物及探針混合液*2（引物Mix） |
850 μL |
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說明書 |
1 份 |
*1：PTD為豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒和豬Delta冠狀病毒英文簡稱PEDV、TGEV、PDCoV字母縮略而來。
*2：該引物及探針混合液中包括豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬Delta冠狀病毒和豬源內(nèi)質(zhì)控的引物、探針等，該混合液使用及保存時請盡量避光。
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試劑 |
體系 |
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20×反轉錄酶混合液 |
1×（N+1）μL |
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2.5×PTD qPCR 反應液 |
8×（N+1）μL |
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2.5×PTD引物及探針混合液 |
8×（N+1）μL |
§ 將以上配制的反應體系充分混勻后，分裝每個反應管中各17 μL。取3 μL 模板，加入相應反應管中，混勻并作好標記。
§ 在熒光PCR 擴增儀上進行以下反應：UNG酶消化25 ℃ 5 min，反轉錄55 ℃ 5 min，預變性95 ℃ 2 min；循環(huán) 95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共40 次，每次循環(huán)的第二步（60 ℃ 30 s）收集熒光信號（報告基團“PEDV-FAM、IC-HEX、PDCoV-ROX、TGEV-Cy5”，淬滅基團“None”）。
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